一、蛋白質的直接定量（UV法）

    這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質，一般要消除320nm的“背景”信息，設定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，佳的線性范圍在1.0-1.5之間。實驗中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個正常的現(xiàn)象。事實上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因為Warburg公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大，從而顯得結果很不穩(wěn)定。蛋白質直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受到平行物質的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。

二、比色法蛋白質定量

    蛋白質通常是多種蛋白質的化合物，比色法測定的基礎是蛋白質構成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應，產(chǎn)生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數(shù)目直接相關，從而反應蛋白質濃度。

    比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry等幾種方法。

1、Lowry法：以早期的Biuret反應為基礎，并有所改進。蛋白質與Cu2+反應，產(chǎn)生藍色的反應物。但是與Biuret相比，Lowry法敏感性更高。缺點是需要順序加入幾種不同的反應試劑；反應需要的時間較長；容易受到非蛋白物質的影響；含EDTA，Tritonx-100，ammoniasulfate等物質的蛋白不適合此種方法。

2、BCA（Bicinchoninineacid assay）法：這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2+反應產(chǎn)生Cu+，后者與BCA形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關系*，反應后形成的化合物非常穩(wěn)定。相對于Lowry法，操作簡單，敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質之間以及去污劑的干擾。

3、Bradford法：這種方法的原理是蛋白質與考馬斯亮蘭結合反應，產(chǎn)生的有色化合物吸收峰595nm。其大的特點是，敏感度好，是Lowry和BCA兩種測試方法的2倍；操作更簡單，速度更快；只需要一種反應試劑；化合物可以穩(wěn)定１小時，方便結果；而且
與一系列干擾Lowry，BCA反應的還原劑（如DTT，巰基乙醇）相容。但是對于去污劑依然是敏感的。主要的缺點是不同的標準品會導致同一樣品的結果差異較大，無可比性。